8 ods—a硅胶。甲醇为色谱纯。其他试剂均为分析纯。

而所用的试剂是来自上海碧云天生物技术有限公司的k-8。美国siga公司的dso。胎牛血清、ri1640、／s、try。96孔细胞培养板。

还有人胃癌细胞nk-45、sgc-7901。5-氟尿嘧啶注射液。

实验方法是，首先提取与分离取干燥乌骨藤5千克，粉碎，百分之80乙醇回流提取3次(分别是4、3、3 小时)。

然后，合并提取液，减压浓缩，得浸膏213克，加水溶解，石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，减压回收溶剂。

得到石油醚部位15克、氯仿部位15克、乙酸乙酯部位27克、正丁醇部位42克

。氯仿部位以氯仿一甲醇梯度洗脱，得到药物标志物1—3，经反复硅胶柱层析，分别得到化合物9(10毫克)、1(14毫克)、6(24毫克)。

乙酸乙酯部位以石油醚-丙酮梯度洗脱，得到流份实验标志物1～4，其中实验标志物1步硅胶柱层析，得到化合物1(65毫克)。

实验标志物3经反复硅胶柱层析和sehadex lh-20凝胶柱纯化，得到化合物7(35毫克)和8(26毫克)。

正丁醇部位以氯仿一甲醇梯度洗脱，得到流份实验标志物1～4，其中实验标志物1经反复硅胶柱层析，得到化合物5(51毫克)。

实验标志物4上ods柱，甲醇一水梯度洗脱，再经sehadex lh-20凝胶柱纯化，得到化合物2(42毫克)、3(57毫克)、4(73毫克)。

既然我觉得它有用，那么我们采用抗肿瘤活性实验法进行实验。

首先，细胞接种用含百分之10胎牛血清的ri1640培养液培养nk-45和sgc一7901，收集对数生长期细胞，消化后调整其悬液浓度，以每孔1x104个细胞接种于96孑l板，每孔200 trl。

细胞培养将细胞板放人：孵箱中，在37摄氏度、百分之5，条件下培养24 小时，当细胞达到80％～90％汇合度时，弃去培养基。

接下来，就是细胞给药。

我们将将样品用dso溶解后，按200、100、50、25、12．5克／毫升质量浓度加人细胞孔内，重复3批，并另加3孔作为阳性对照(5-氟尿嘧啶)组。

3孔作为dso对照组，每孔总体积100止，在酶联免疫检测仪上测定各孑l吸光度，计算细胞抑制率、

公式为抑制率=(1一加药细胞吸光度／对照细胞吸光度)x100％。再采用logit法计算ic。